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缺口平移

以限量的DNase I在待标记的双链DNA的每一条链上产生若干个单链缺口;再利用E.coli DNA多聚酶Ⅰ的 5'-3'外切酶活性和5'-3'多聚酶活性,在缺口处的5'末端每切除一个核苷酸,则在3'末端添加一个核苷酸,以修补缺口,随着缺口在DNA链上的移动,标记的核苷酸就掺入到新合成的DNA链中。

此法特点是快速、简便、标记的探针均匀、特异性高;适用于较长的双链DNA;DNA多聚酶必须是E.Coli DNA多聚酶的全酶;DNA酶Ⅰ的浓度一定要适宜。

1、用DNase I处理双链DNA,使之随机产生单链断裂。

2、DNA聚合酶I的5'-3'外切酶活性从断裂处5'除去一个核苷酸,同时5'-3聚合酶活性将一个放射性核素标记的单核苷酸引入到断裂的3'端。

3、反应重复进行,结果标记的核苷酸代替了原来的核苷酸残基,形成了放射性的DNA分子。

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